Western及IP裂解液

产品描述：

Western及IP裂解液能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗体结合能力或酶学活性，因此适宜于进行免疫共沉淀。

使用说明：

制备细胞裂解产物

1、4℃、800 g离心5分钟收集培养细胞，而后用预冷的PBS洗涤细胞两次。估计细胞离心后的体积（PCV, 10⁶ cells≈20 µL, 10⁷ cells≈100 µL PCV）； 

2、每50～100 µL PCV加入5倍体积Western及IP裂解液（250～500 µL），涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；

3、4℃、12000 g离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物

1、取50～100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2、加入0.5～1 mL预冷的Western及IP裂解液；

3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20～40次，直到95％的细胞被破碎，涡旋震荡10秒，冰浴放置20分钟；

4、4℃、12000 g离心15分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物，可用于后续的免疫沉淀或者Western Blot等实验。

温馨提示：

1、在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2、在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；

3、Western及IP裂解液中未加入蛋白酶抑制剂，使用时请添加蛋白酶抑制剂。