加强型RIPA裂解液（不含蛋白酶抑制剂）

产品描述：

加强型RIPA裂解液加强型对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用，是常用的细胞组织快速裂解液。使用加强型RIPA裂解液特别适于提取膜蛋白以及western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。

使用说明：

制备细胞裂解产物

1、4℃、800 g离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 10⁶ cells≈20 µL, 10⁷ cells ≈100 µL PCV）；

2、每50～100 µL PCV加入5倍体积加强型RIPA裂解液（250～500 µL），冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

3、4℃、12000 g离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；

4、假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，4℃、12000 g离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

制备组织裂解产物

1、取50～100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2、加入0.5～1 mL预冷加强型RIPA裂解液；

3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20～40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

4、4℃、12000g离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；

5、假如所得蛋白产物较为粘稠，95℃加热5分钟，然后迅速冰浴5分钟，4℃、12000 g离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；

6、20％的甘油保存于-70℃或-20℃。

温馨提示：

1、在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2、在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；

3、加强型RIPA裂解液中未加入蛋白酶抑制剂，使用时请添加蛋白酶抑制剂。