无酶细胞消化液

描述：无酶细胞消化液不含蛋白酶，但能使贴壁细胞与培养瓶皿表面有效脱离达到分离细胞的 目的。与常规胰蛋白酶消化方法相比，无酶细胞消化液作用温和，不损伤和破坏细胞，不影响细胞生物学特性，是肿瘤细胞在体移植实验的最佳细胞脱壁方法。细胞用无酶消化液脱壁后，可直接进行传代培养或离心收集用于其它实验。由于未使用蛋白酶，因此特别适于收集细胞进行核蛋白和胞浆蛋白制备、Western Blot、免疫共沉淀实验，同时能避免样品蛋白降解，并避免蛋白酶中的RNA酶对RNA的降解。

特点：

1）室温孵育10分钟，贴壁细胞即可从瓶皿脱落，温和而有效 

2）脱壁的细胞可用于连续传代

3）培养肿瘤细胞进行在体移植实验的最佳消化方法

4）避免蛋白酶过度消化细胞及降解样品蛋白

5）制备胞核和胞浆蛋白、进行 Western Blot、免疫共沉淀

6）避免蛋白酶中污染的 RNA 酶降解 RNA

操作步骤：

  1. 用PBS洗涤单层培养细胞，尽可能完全去除瓶中液体。

  2. 加入适量无酶细胞消化液使其覆盖细胞表面，晃动瓶皿，使所有细胞均充分接触无酶消化液。

  3. 室温放置10分钟或适宜时间，偶尔晃动瓶皿，直到细胞完全脱壁。可加入细胞培养基或 2-3倍体积PBS缓冲液终止反应。脱壁后可能有成片细胞连在一起的现象，属于正常，如用作肿瘤移植，上述情况的产生可利于肿瘤细胞的生长。37℃时脱壁反应会加速。

  4. 500g离心 5-10 分钟，弃上清，收集细胞。

  5. 收集的细胞可用于：(1) 胞核胞浆蛋白制备；(2) Western blot；(3) 免疫沉淀实验；(4) DNA-蛋 白结合实验；(5) RNA 提取；(6) 分瓶传代