SbfI

产品组成：

产品描述：

本产品SbfI是经过基因工程重组的快速限制性内切酶，能够在5～15 min内精确完成DNA切割的限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。具有如下特点：

• 5～15 min内即可完成酶切反应；
• 共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；
• 含通用的Buffer和Color Buffer，其中Color Buffer含红色和黄色示踪染料，酶切产物可直接用于凝胶电泳；
• 良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切；
• 去磷酸化、连接试剂在本酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，完成“酶切-修饰-连接”过程。

使用说明：

1.  DNA快速酶切流程

1）按如下建议的加样顺序配制体系反应液（冰上操作）：

*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具有一定的离子强度，10×Buffer A可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。

2）轻轻吹打或轻弹管壁以混匀反应液（切勿涡旋），瞬时离心收集挂壁液滴。

3）对于质粒DNA，37℃孵育15 min；对于PCR产物，37℃孵育15～30 min；对于基因组DNA，37℃孵育30～60 min。

4）80℃孵育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。

2. 双酶切或多酶切

1）每种内切酶的用量为1 μL，并根据需要适当扩大反应体系。

2）所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3）如果选用的几种内切酶最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。

质量控制：

1.功能活性检测：最适反应温度下，在20 μL反应体系中，1 μL SbfI能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

2.超长时间温育检测：最适反应温度下，将1 μL SbfI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

3.酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1 μL SbfI消化底物，回收酶切产物，在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

4.非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1 μL SbfI与1 μg超螺旋质粒DNA共同温育4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

储存：-20℃保存

温馨提示：

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。