细胞增殖-毒性检测试剂盒Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

储存：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效，请勿反复冻融

产品描述：

CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是MTT的一种升级替代产品，在电子耦合剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

使用说明：

1、在96孔板中接种细胞悬液(100 µL /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

2、按照实验需要，进行培养并给予0～10 µL特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。

3、每孔加入10 µL CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200 µL，则需加入20 µL CCK-8溶液，以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和 CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

4、在细胞培养箱内继续孵育1～4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在 0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600 nm的波长，作为参考波长进行双波长测定。

6、如果需要暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 µL 0.1 M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，室温避光保存，24小时内吸光度不会发生变化。

结果分析：

细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%

抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100%

As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质)

Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)

Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)

注意事项：

1、接种时注意细胞悬液要混匀，以避免细胞沉淀，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。

3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。

4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基， 直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5、加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。

6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，避免产生误差。

7、在使用过程中，请在生物安全柜内无菌操作，避免产生污染，影响实验。

8、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。