ECL发光液

产品描述：

超敏ECL发光液可用于直接或间接检测与辣根过氧化物酶HRP关联的蛋白或核酸底物，并通过X光片压片或其它适当化学发光成像设备检测样品。本品能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，具有通用性、高灵敏度和高性价比的优点，可满足用户的免疫印迹应用需求。

使用说明:

1. 常规电泳、转膜、HRP标记抗体或核酸探针孵育、洗膜，注意用HRP标记IgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。核酸杂交膜用HRP标记探针杂交，洗膜。

2. 洗涤膜上的HRP标记二抗时，同时配制新鲜发光液：取等体积的ECL A液和ECL B液在干净容器中充分混合（注意吸取A液和B液的吸头一定要分开，避免试剂污染），放置使之升至室温后，建议立即使用工作液。室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。

3. Western Blot最后一次洗膜后，镊子将膜取出，用滤纸吸去多余的洗液（切勿接触膜的蛋白面）。

4. 根据膜的大小，将发光工作液(0.125 mL发光液/cm²膜面积)滴加至膜上，确保工作液均匀覆盖在膜上，放置1～3分钟。准备立即使用全自动化学发光成像系统扫描。

*注：孵育时间过长不会增加灵敏度，还可能会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，发光液过少不利于反应进行，也会导致膜上条带曝光不均，明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。

5. 用镊子夹起膜，用滤纸吸去多余的液体，将膜放在两片保鲜膜中间，随后进行压片检测或化学发光成像仪检测。

注意事项：

1. 步骤1～3可在日光灯下操作，但发光液曝露于强光下时间过久可导致灵敏度降低。戴手套可以避免在膜上留下手印。

2. 蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。

3. 发光液孵育约1分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可通过全自动化学发光成像系统扫描。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光液检测。

4. 建议第一次曝光60秒，之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5～30分钟期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。

5. 由于不同发光液的灵敏度不同，请选择合适的抗体稀释浓度进行孵育!

6. 某些市售保鲜膜包裹印迹膜时会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。

7. 暗室曝光时，使用肉眼可见的荧光-放射自显影曝光标签可帮助确定胶片上条带的准确位置和大小。

8. NaN₃会抑制HRP活性，如果回收二抗应避免使用NaN₃，如必需使用勿超过0.01%。