RIPA裂解液

产品描述：

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA裂解液所得产物可用于Western Blot、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)等实验。

产品成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS。

注：本产品不含蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等，可以根据具体实验需求自行添加。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可使用洞析生物的BCA蛋白定量试剂盒（DXS1504）检测蛋白浓度。

使用说明：

1. 对于悬浮细胞样品

a. 取适量的裂解液，根据实验需要加入适量的蛋白酶、磷酸酶抑制剂混合物。

b. 离心收集细胞沉淀，轻轻弹击管底尽量把细胞分散开。按照6孔板每孔细胞加入150～250 μL裂解液的比例加入裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞。冰浴放置10分钟，并每隔5分钟轻弹管底以充分裂解细胞。

c. 充分裂解后，12000 g 4℃离心10分钟，将上清转移至新的离心管中，即获得细胞总蛋白产物。

2. 对于贴壁细胞样品

a. 取适量的裂解液，根据实验需要加入适量的蛋白酶、磷酸酶抑制剂混合物。

b. 去除细胞培养液，用PBS或无血清培养基洗涤细胞一次(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250 μL裂解液的比例加入裂解液。冰浴放置10分钟，并每隔5分钟在轻拍皿/孔板底以充分裂解细胞。

c. 充分裂解后，12000 g 4℃离心10分钟，将上清转移至新的离心管中，即获得细胞总蛋白产物。

*注意：若所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟后再进行步骤c操作。

3. 对于组织样品：

a. 取50～100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次并离心弃去PBS。

b. 取适量的裂解液，根据实验需要加入适量蛋白酶、磷酸酶抑制剂混合物。

c. 按照每20 mg组织加入150～250 μL裂解液的比例加入裂解液。

d. 在4℃条件下用玻璃匀浆器匀浆20～40次，也可将组织样品冷冻后液氮研磨后加入RIPA裂解液，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒，直到95％的细胞被破碎。

e. 12000 g 4℃离心10分钟，将上清转移至新的离心管中，即获得组织总蛋白产物。

产品说明：

1. 为取得最佳的使用效果，可以适当分装后使用。

2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3. 转移上清液时尽量不要吸入底部的沉淀物。

4. 对于免疫沉淀或免疫共沉淀实验，最好在实验前进行蛋白提取，避免某些不稳定蛋白的降解。

5. RIPA裂解液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择添加。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。