酵母双杂交点对点
酵母双杂交点对点
一、 实验原理：
酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相
互作用。转录因子可以和 DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种 DNA 结合
与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即 DNA 结合结构域(Binding
Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录激活都是必须的。在 GAL4 系统中利用转录因子 GAL4 的 DNA 结合结构域
GAL4-BD 与激活结构域 GAL4-AD 的特异载体，分别与基因的 ORFs 融合，转化酵母细胞。
在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将 GAL4-BD 和 GAL4-AD 结合在一起，从而
与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应
的营养缺陷型培养基上筛选阳性。酵母双杂交（点对点），最终结果是确定候选的蛋白质-
蛋白质是否存在相互作用。
二、实验步骤
1. 准备酵母感受态细胞（LiAc Method）。
2. pGADT7 和 pGBKT7 共转化酵母菌株 AH109，涂二缺平板（含自激活和毒性检测），28
度恒温箱培养。
3. 挑取二缺平板克隆至四缺，四缺（含 x-a-gal），28 度恒温箱培养。
三、实验结果：
1. 二缺和四缺平板原始图片拍照。
2. 原始图片整理图版。
创建时间：2020-11-26 16:13
