酵母双杂交文库筛选
酵母双杂交文库筛选
一、 实验原理：
酵母双杂交系统是在酵母体内通过重建有活性转录因子的结构来鉴定蛋白质之间的相
互作用。转录因子可以和 DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录。这种 DNA 结合
与转录激活的功能是由转录因子上两个相互独立的结构域即 DNA 结合结构域(Binding
Domain, BD)和转录激活结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对
于基因的转录激活都是必须的。在 GAL4 系统中利用转录因子 GAL4 的 DNA 结合结构域
GAL4-BD 与激活结构域 GAL4-AD 的特异载体，分别与基因的 ORFs 融合，转化酵母细胞。
在酵母内表达的蛋白若发生相互作用时，就会将 GAL4-BD 和 GAL4-AD 结合在一起，从而
与上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)结合，激活相应报告基因的表达，在相应
的营养缺陷型培养基上筛选阳性。酵母双杂交文库的构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的
互作蛋白大规模筛选分析蛋白质间的相互作用，是现在分子生物学与生物化学常用的手段。
二、实验步骤
1.诱饵基因的自激活和毒性检测，检测通过后继续下一步实验
2.诱饵质粒转化酵母细胞，验证合格后再转化文库质粒
3.筛选结果的测序
三、实验结果：
1. 文库筛选报告（电子版），
2. 文库筛选图片（电子版），
3. 筛选测序结果和阳性克隆实物。
创建时间：2020-11-26 16:10
